La chromatographie liquide haute performance (HPTLC) est un outil efficace pour vérifier l'identité des végétaux par rapport à une plaque de référence. Grâce à cet outil, nous pouvons confirmer le profil d'une plante et garantir l'utilisation du bon matériel.
Avec la chromatographie sur couche mince (CCM), les composants individuels d'un mélange sont séparés sur une fine plaque recouverte de verre, puis placée dans une chambre de développement. La plaque est placée sous une lampe ultraviolette et les bandes des différents composants sont visualisées. Contrairement à une chromatographie sur couche mince standard, la chromatographie sur couche mince (CCM) est automatisée par robot, éliminant ainsi les incertitudes liées à l'application manuelle des échantillons sur les plaques.
Nous utilisons le HPTLC pour détecter la contamination par les mycotoxines, une classe dangereuse de toxines qui peuvent se développer sur les matières végétales dans des conditions humides.
Vous pouvez voir une plaque HPTLC ci-dessous.
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La chromatographie sur couche mince est une méthode reconnue pour l'analyse des plantes et autres échantillons complexes depuis la fin des années 1930. Aujourd'hui, la chromatographie sur couche mince moderne allie robustesse analytique et haut débit d'échantillons à la possibilité d'utiliser toutes sortes de méthodes de détection spécifiques, telles que la détection classique UV/Vis/Fluorescence, la spectrométrie de masse ou l'analyse dirigée par effet. Cette méthode augmente la quantité d'informations permettant un criblage rapide et efficace de nouveaux composés et l'identification des matières premières, notamment pour les échantillons à forte charge matricielle tels que les médicaments à base de plantes, les cosmétiques et les échantillons alimentaires.
La chromatographie sur couche mince (CCM) HPTLC, la forme la plus avancée de chromatographie sur couche mince, est un outil puissant, simple et économique pour tester l'identité, la pureté et la concentration (teneur) des substances végétales, ainsi que pour exclure toute falsification lors du contrôle qualité. Avec la publication de chapitres généraux par la Pharmacopée américaine (USP), <203>) et de la Pharmacopée européenne (Ph.Eur. 2.8.25). La HPTLC est officiellement reconnue comme une technique d'analyse hautement standardisée et donc reproductible. L'utilisation de plaques haute performance, d'instruments et de logiciels adaptés, d'une méthodologie standardisée et de méthodes validées garantit des résultats fiables et entièrement conformes aux Bonnes Pratiques de Fabrication (BPF) actuelles. Les empreintes HPTLC permettent une comparaison visuelle pratique de plusieurs échantillons, même s'ils proviennent de plaques différentes (et de laboratoires différents dans le monde). Des images de référence (empreintes HPTLC de matériaux de référence botaniques ou autres références) peuvent être utilisées pour qualifier les données et qualifier les échantillons de réussite ou d'échec en fonction de leur similarité ou de leur différence.
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La chromatographie sur couche mince haute performance (CCMHP) est une technique d'analyse utilisée pour la séparation, l'identification et la quantification des composants d'un mélange. Cette méthode chromatographique puissante et polyvalente présente des similitudes avec la chromatographie sur couche mince (CCM) traditionnelle, mais offre des performances supérieures en termes de vitesse, de sensibilité et de résolution. Voici quelques aspects clés de la CCMHP en tant qu'outil d'analyse :
- Principe:
- La HPTLC fonctionne sur les mêmes principes que la CCM, impliquant la séparation des composants en fonction de leur affinité pour une phase stationnaire et une phase mobile.
- La phase stationnaire est généralement une fine couche de matériau adsorbant (par exemple, du gel de silice ou de l'oxyde d'aluminium) appliquée sur une plaque de verre ou d'aluminium.
- La phase mobile, un solvant ou un mélange de solvants, remonte la plaque par capillarité, entraînant l'échantillon avec elle.
- Avantages de la HPTLC :
- Haute résolution : La HPTLC offre une meilleure résolution et une meilleure séparation des composants par rapport à la TLC traditionnelle.
- Vitesse: La HPTLC permet des séparations plus rapides, ce qui en fait une technique efficace en termes de temps.
- Sensibilité: Il offre une sensibilité améliorée, permettant la détection de traces d’analytes.
- Quantification: La HPTLC peut être utilisée pour l'analyse quantitative par densitométrie, où les taches séparées sont quantifiées en fonction de leur intensité.
- Instrumentation:
- Les systèmes HPTLC comprennent une chambre de développement, où la séparation chromatographique a lieu.
- Des systèmes automatisés d'application et de développement d'échantillons sont disponibles pour une précision et une reproductibilité accrues.
- Les densitomètres sont utilisés pour l'analyse quantitative des composants séparés.
- Applications:
- La HPTLC trouve des applications dans divers secteurs, notamment les produits pharmaceutiques, l'alimentation et les boissons, l'analyse environnementale, la science médico-légale, etc.
- Il est particulièrement utile pour analyser des mélanges complexes et identifier les impuretés dans les produits pharmaceutiques.
- Analyse quantitative:
- La HPTLC peut être utilisée pour l'analyse quantitative en mesurant l'intensité des spots correspondant aux composants séparés.
- Les courbes d’étalonnage sont souvent construites à l’aide de solutions standard pour relier l’intensité du spot à la concentration.
- La préparation des échantillons:
- Une préparation adéquate des échantillons est essentielle pour une analyse HPTLC réussie.
- Les échantillons sont souvent appliqués sous forme de petits points ou de bandes sur la plaque TLC.
- Méthodes de détection :
- La visualisation des composants séparés est généralement effectuée à l'aide de diverses méthodes de détection, notamment l'absorption UV, la fluorescence et les réactions de dérivatisation.
- La densitométrie est souvent utilisée pour l’analyse quantitative.
- Développement de méthodes :
- L'optimisation des conditions chromatographiques, telles que le choix de la phase stationnaire, la composition de la phase mobile et les conditions de la chambre de développement, est essentielle pour obtenir la séparation souhaitée.
En résumé, la chromatographie sur couche mince (HPTLC) est un outil d'analyse précieux qui allie les avantages de la chromatographie sur couche mince à des performances améliorées. Sa haute résolution, sa vitesse et sa sensibilité la rendent adaptée à un large éventail d'applications en chimie analytique.